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미생물이야기 이염과립색소(Metachromatic granules), 내막(Capsule,)항산성 염색방법에 대해 알아보자.
2013-08-13 15:10:36
이엠생명과학연구원

항산성

Mycobacterium이나 Nocardia 가운데는 통상의 방법으로는 염색이 잘 안되며, 가온염색이나 장시간 염색을 하여야만 염색이 되는 것이 있다. 이렇게 염색된 세포는 산이나 알코올로 처리하여도 탈색이 되지 않는다. 이와 같은 성질을 가지고 있는 세포를 항산성균(acid - fast bacteria)이라 하며 Mycobacterium tuberculosis가 그 전형적인 것이다.

그러나 균종에 따라서는 약하게 염색이 되거나 부분적으로 염색이 되는 것도 있어 반드시 대조균과 함께 염색할 필요가 있다.

항산성 염색액

Ziehl의 phenol fuchsin

-

Loffler의 Methylene blue 액

-

A 액

-

Mrthylene blue

0.3 g

Ethyl alcohol(95%)

30 ㎖

B 액

-

0.01% KOH

100 ㎖
A액과 B액을 혼합한다.

- 염색 순서 -

① 도말, 건조, 고정.

② Ziehl의 phenol fuchsin 액으로 3∼5분간 가열 염색 : 이 때 염색액이 없어지지 않게 잘 보충한다.

③ 수세.

④ 3% 염산 알코올로 도말면이 육안으로 보아서 완전히 무색이 될 때까지 탈색한다.

⑤ 수세.

⑥ Loffler의 Methylene blue액(물로 4∼5배 희석한 액)으로 약 30초간 염색.

⑦ 수세, 건조, 검경.

가열염색시 표본을 불이 약한 gas burner 상에서 증기가 달아날 정도만 가열한다. 또는 석면판 위에 놓고 아래에서 약한 분로 가열한다. 이 조작 중에 색소액이 비등하게 해서는 안된다.

이 염색법에 의해 항산성균은 적색으로 그 외의 것은 청색으로 염색된다.

 

 내막(Capsule)

내막염색은 Tyler에 의한 Anthony 변법으로 이 염색에 의하면 내막은 청자색으로 세포는 진한 청색으로 염색된다.

Tyler 용액

Crystal violet

0.1g

Acetic acid, glacial

0.25㎖

Distilled water

100㎖

- 염색 순서 -

① 도말, 풍건

② 4∼7분간 Tyler용액에 염색한다.

③ 20% 황산은 용액으로 씻는다.

④ 여지로 황산은 용액을 충분히 흡습시켜 건조한 후 검경한다.

20% 황산은 용액으로 씻어내림으로써 도말면에 황산은이 결정화하면, 그대로 유침렌즈를 사용하여 관찰한다.

 

이염과립색소(Metachromatic granules)

이염과립은 Corynebacterium diphtheriae 등에 잘 나타나며, 균체의 양 단에 존재하는 경우가 많아서 극소체(polar granules)라고도 한다. Laybourn에 의한 Albert변법에 의하면 이염과립은 청흑색으로, 세균세포는 담녹색으로 염색된다.

이염과립 염색액

Malachite green

0.2 g

Toluidine blue

0.15 g

Ethyl alcohol(95%)

2 ㎖

Aceticacid, glacial

1 ㎖

Distilled water

100 ㎖
색소를 먼저 Ethyl alcohol에 용해하고 빙초산과 증류수를 혼합한 것을 색소알코올 용액에 가한다. 24시간 방치한 후 여과하여 사용한다.

- 염색 순서 -

① 도말, 건조, 고정

② Laybourn 색소액으로 3∼5분 염색한다.

③ 수세하고 난 후 물을 여지로 흡입시킨다.

④ Lugol 액으로 1분간 처리한다.

⑤ 수세, 건조, 검경한다.




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