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미생물이야기 치즈원유의 미생물방법에는 어떤것이 있을까?
2013-08-14 14:54:56
이엠생명과학연구원

치즈원유 미생물 검사

 

우유에 들어 있는 미생물의 검사는 미생물 수를 직접 측정하거나 오염도를 간접적으로 측정하는 방법이 있다. 직접 측정법으로는 총 미생물수 측정법, 직접 검경법이 있으며, 간접적인 측정법에는 색소 환원 시험법 및 미생물의 대사산물 또는 ATP, DNA의 양을 분광분석기를 사용하여 신속히 측정하는 방법이 있다.

 

[준비물]

 

고압증기멸균기

Petri dish

Screw cap tube 15 ml

Plate count Agar

피펫 1 ml, 10 ml

항온수조 38C

원유  500 ml

 

[실험방법]

 

색소환원시험법 (Methylene blue 환원 시험법)

 

색소환원시험법에는 Methylene blue 환원시험법과 Resazurin 환원시험법이 있다. 미생물의 증식, 발육할 때에 우유성분을 산화 이용하면서 전자를 산소 또는 색소분자에 전달하여 이들을 환원 시키게 된다. 즉, 산화 환원 전위의 저하가 따르게 된다. 원유중에 미생물 수가 많으면 많을수록 환원 속도가 빨라진다. 환원전위가 낮아지면 사용한 색소의 색상이 변색 또는 탈색이 일어나게 된다. 이러한 특성을 이용하여 원유, 우유 및 크림중의 미생물 함량을 간접적으로 조사할 수 있다.

 

1. 시험순서

1) 멸균된 cap test tube 에 원유를 10 ml씩 피펫으로 취한다.

(또는 원유 100ml에 MB tablet 1정)

2) Methylene blue액을 1ml씩 가하고 cap을 닫는다.

3) Test tube상하로 뒤집어 주어 methylene blue와 원유가 잘 섞이도록 한 후 시 험관 랙에 꽂아 냉각시킨다.

4) 37 C 로 온도를 맞춘 Water bath에 test tube내 원유층 상부 경계면에 수면 이 잠기도록 고정하고 수침시킨다.

5) 배양하기 시작한 시간을 기록하고 배양개시 30분 후 색소의 변색을 관찰한다.

6) 30분 간격으로 관찰하되 2시간 후에는 적합판정을 내린다. 그 후 6 시간까지 색소의 환원 유무를 관찰한다.

7) 관찰 시간마다 확인한 test tube를 조용히 1회 뒤집어 준다.

8) 환원탈색수준 관찰시 4/5이상 환원 탈색되면 양성으로 간주한다.

 

2. 결과 판정법

환원시간에 따른 미생물수 추정으로 판정 (Methylene 환원 시험법)한다.

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환원시간 등급 추정 세균수

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8시간 이상 Excellent (1급) 2만 이하

6시간 30분 이상 Excellent 2만-20만

5시간 30분-6시간 30분 Good (2급) 20만-50만

2시간-5시간 30분 Fair (3급) 50만-400만

20분-2시간 Poor (4급) 400만-2000만

20분 이내 2000만 이상

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* (Methylene blue액 과 Resazurin 액 조제법)

멸균 증류수 200ml에 methylene blue thiocyanate 8.8mg (또는 resazurin 11mg)을 넣고 완전히 용해시킨다. 냉암소 보관하되 1주일 지나면 버린다.

 

 

표준평판 배양법 (식품공전상의 세균수 측정법)

 

1. 표준평판배지의 제조

1) 표준평판 배지를 7.05 g을 뜨거운 증류수 (300m1)에 용해시킨다

2) 121C에서 15분간 고압멸균 (autoclave)시킨다.

3) 이때 petri dish를 함께 멸균 한다

4) 실온에서 약 30분간 방냉하거나 45C의 항온기에서 냉각 시킨다.

 

2. 우유시료 접종

1) 준비한 우유를 멸균 피펫으로 1 ml를 취하여 petri dish에 넣는다

2) 약 15g 정도의 배지를 petri dish에 뚜껑을 조금 열고 붓는다

3) Petri dish를 조용히 회전시키면서 우유와 배지가 잘 섞이도록 한다

4) 그 후 배지가 굳은 것이 확인되면 거꾸로 뒤집어 항온 배양기에서 넣는다

 

3. 세균수 기록

1) 균락 수를 세어 30 - 300 개의 균락을 생성한 것을 택하여 균락의 수로 산정하는 것 을 원칙으로 하되 희석배수를 곱하여 결과를 기록한다

2) 30개 이하일 경우에는 희석 배수가 낮은 것을 측정한다

3) 300개 이상일 경우에는 1cm2이내의 평균 균락수에 65를 곱한다

4) 기록은 125 x 103 / ml (35 C)로 한다 




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