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미생물이야기 비발효 그람음성간균
2013-08-19 09:46:30
이엠생명과학연구원

비발효 그람음성간균

 

포도당 비발효 그람음성 간균을 NFB(Non fermented bacilli)라고 불리운다.

이 균은 토양과 수중에 있으며, 창상감염, 면역기능이 약한 환자에 감염되며, 수술환자 화상환자 등의 입원환자에 흔히 원내감염을 일으킨다. 항균제 및 소독제에 내성이 많다.

임상검체에서 분리되는 빈도중 NFB가 15% 정도이며, 그 중에서

첫번째로 70%가 P. aeruginosa이며, 

두번째로 Acinetobacter calcoaceticus가 분리되며,

세번째로  Xantom onas maltophilia, 이어서  Alcaligens feacalis, Pseudomonas fluorescens, Pseudomon  as putida, Pseudomonas cepacia,  Pseudomonas     stutzeri,  Flavobacterium 등의 순서로 분리된다.

    

※ 검사의 요점

  BAP 평판배지에서 무색의 회백색으로 발육된 집락이 oxidase 양성이고 그람음성 간균임을 확인하고 (Acinetobacter 는 oxidase 음성이다) 이들 집락을 KIA(TSI)배지에 접종하여 배양시킨후에 반응이  K/K 로 나타나면 일단은 NFB를 생각 할 수 있다.

 동시에 MacConkey 한천평판배지에서 발육된 집락중 lactose를 비분해하여 무색의 회백색 집락을      KIA(TSI) 배지에  접종하여 배양한후 반응이 K/K 로 반응이 나타나면 일단은 NFB를 생각 할 수 있다.

   

  포도당 비발효 그람음성 간균의 공통점

 호기성, 포자형성 안함, 그람음성간균 또는 구간균, 당 이용능은 산화적(oxidation) 포도당 비발효 그람음성 간균의 단서 MacConkey agar에서 유당 비 분해하여 무색 회백색의 집락 Oxidase 양성 이고(Acinetobacter oxidase 음성) TSI, KIA 반응이 K/K 로 나타나고, BAP  발육되나, MacConkey agar 에서 발육 못 하는균 ( 예 ; Moraxella )  

     

포도당 비발효 그람음성 간균은 다음과 같은 시험을 실시하여 동정한다.

    1. 전통적 생화학적 동정--- KIA,  urea, motility,  I M Vi C, nitrate, oxidase, gelatin,  LDC,  ODC, 

         Hugh & Leifson의  O-F 시험 --- glucose,  maltose, mannitol, xylose, fructose,

     2. Kit system 동정 ---  API NE, API 20 E,  Oxi/Ferm,  Minitek,  Uni-N/F Tek

     3. 자동화 기기 동정 ---  Vitek system,  Micro scan system,  ATB system 

    

1. Pseudomonse 속

     병원성 : 화상감염, 창상감염, 기회감염, 원내감염, 요로감염, 호흡기감염, 담도감염, 패혈증

   

  1) Pseudomonas aeruginosa

     1. 형  태 : 그람음성 간균이며 총모성(극모성) 편모가 있어 운동성이있다.

     2. 배  양 : 몇가지 배지에 배양 성상은 다음과 같다.

         a.   NAC(Naridric acid certrimide)배지에서 선택적으로 발육된다.

         b.   S S agar,  MacConkey agar 에서 발육시 lactose를 비분해하여 무색의 2 ~ 3mm 

             정도의 회백색의 불규칙한 집락인데 시간이 경과하면서 녹색의 색소를 지닌다.

         c.   Nutrient agar 와 Blood agar 에서 잘 발육하며, 회백색 불투명하고,  -용혈이있어 시간이

               경과  되면서 pyocyanin 색소를 생성하여 녹색의 집락으로 변한다.

         e.   pyocyanin 색소를 생성을 보기위한 King A 사면배지에 배양하여 암소에서

             Wood lamp 자외선 램프를비추면 형광을 나타냄

             BAP 배지나 MacConkey agar 접종 후 42 ℃ 에서 발육되는 특징이 있다.      

         d.  집락을 냄새 맡으면 방향족 냄새인 깨꽃 향기, 아카시아 꽃 향기 냄새가난다.

         e.   Catalase : 양성,   Oxidase : 양성,  Cytochrome oxidase : 양성

   

     *  Oxidase 시약

        시 약 : 1 % tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride  또는

                  1 % dimethyl-p-phenylenedimine dihydrochloride        

        *  Cytochrome oxidase( Indolephenol oxidase)

                시약 1 : 1 % α-naphthol (in 95 % ethanol)

                시약 2 : 1 % methyl-p-phenylenediamine dihydrochlorise

           상기시약을 집락에 떨어뜨리거나, 집락을 여과지에 뭍히고 시약을 떨어 뜨려

           1 ~ 2 지나서 보라색으로 변하면 Oxidase 시험 양성이다

         * Pocyanin 색소 생성

            Pseudomoans aeruginosa 만 이 색소 생성하는것만으로도 균을 동정할 수 있다.

            수용성, chloroform 에 추출

            Mueller Hinton agar 에서 청색 색소를 잘 나타낸다.

            Pocyanin 색소를 보기위해 King A 사면배지에 배양한다.

         * Fluorescein 색소 생성 

            Pyoverdin(fluorescein) : 황색색소 생성 자외선등 아래서 형광을 나타냄

            수용성, chloroform 에 불용성

            Fluorescein 색소생성 배지 : King B 배지

            Fluorescein 색소생성  균주 : P. aeruginosa, P. fluorescens,  Burchodelia (P.) cepacia

    3. 성상확인 시험 : TSI , KIA agar : K/K,   Urea  : 음성,   Motility : 양성

                      I M Vi C  : - - + + ,   Ornithine : 양성,    Lysine  :  음성, 

                      Gelatin액화 : 양성,

    4.  O - F 배지에서 Oxidation - Fermentation (산화 - 발효 )시험

          O F basal medium 100ml( peptone 0.2 %) + glucose 1 gm

          O - F  glucose 배지에서  glucose만 : 산화적(oxidation)으로 분해(황색)한다.

          O - F  maltose,  lactose,  sucrose 배지에서 : Non oxidation(비 산화 녹색)비 분해.

            *  대부분 당을 분해하지 않아서 포도당 비발효 간균 이라고 한다. 

    5. 색소생성 시험 : King 사면배지나, Seller 배지에 배양된 균을 암소에서 자외선(Wood) 조명을 비추면 형광 빛이 보인다

    6. 항균제 감수성 : Gentamycin, tobramycin, amikamycin, colistin, carbenicillin, polymyxin  등에 감수성이고 그 외의 항균제에는 내성이다.

 

 2.  Pseudomonas fluorescens

    병원성 : 화상, 창상, 요도 객담에서 분리되며, 기회감ㅇ며, 원내감염

     특 성 : MacConkey agar 무색 집락,   oxidase 양성, TSI, KIA : K/K,   gelatin  액화성,Pyoverdin(fluorescein)   색소를 생성한다. 

          * Fluorescein 색소생성 배지 : King B 배지

      표   P. aeruginosa,  P. fluorescens 및  P. putida

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        성 상          P. aeruginosa   P. fluorescens    P. putida

       -------------------------------------------------------

      42 ℃ 증식           +               -               -

      Fluorescein           +              +               +

      Pyocyanin          +, -              -               -

      -------------------------------------------------------

♥       1.  비발효 그람 음성 간균의종류를 써라

           답 :  Acinetobacter속,    Alcaligenes속,   Achromobacter속,  Agrobacterium속,

                 Flavobacterium속,  Sphingobacterium속,  Xanthomonas속,  Moraxella 속 등

                 Acinetobacter calcoaceticus  Gram 음성 구간균, 운동성 음성,

                 BAP 회백색 MacConkey agar 무색 집락, Oxidase : 음성, TSI, KIA : K/K,  Citrate :  양성

                 Alcaligenes Gram 음성 구간균, 운동성 양성,  BAP 회백색,  MacConkey agar 무색 집락,

                 Oxidase  : 양성,  TSI, KIA : K/K, Citrate   :  음성




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