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미생물이야기 Campylobacter는 선진국에서 가장 흔한 설사 원인균의 하나로서
2013-08-19 09:51:34
이엠생명과학연구원

Campylobacter

 

A. 임상적 의의 
   Campylobacter는 선진국에서 가장 흔한 설사 원인균의 하나로서 잠복기가 길고 발열, 복통, 설사가 주증상이다 . 때때로 심한 혈변을 보일 때에는 궤양성 장염과 감별이 어려울 때가 있으나 우리나라는 궤양성 장염의 빈도가 낮다. 개발도상국가에서도 Campylobacter 설사병은 흔하며 선진국에 비해 무증상인 경우가 많고 증상이 있어도 경미한 경우가 많다. C. jejuni는 변에서 분리되는 Campylobacter의 90% 이상을 차지하는 가장 흔한 원인균으로서 동물, 가축, 조류 등에서 분리되며 조류의 체온이 43℃인 점으로 보아 일차 숙주는 조류일 가능성이 있다. 감염 경로는 오염된 물이나 음식을 통해 전파되며 오염된 냉동 육류제품을 익히지 않고 먹을 때에도 감염될 수 있다.

  

 


 

  C. jejuni의 항균제 감수성 양상은 erythromycin, tetracycline, aminoglycoside, chloramphenicol, fluroquinolone, clindamycin 등에 감수성이며 erythromycin이 치료제로 권장된다. 그러나 Campylobacter 감염은 증상이 경미하기 때문에 항균제 치료가 필요한 환자는 전체 감염의 반이하이다. 치료 대상은 소아 환자, 고열과 혈변이 동반된 환자, 하루에 8번 이상의 잦은 설사가 있거나 설사가 1주이상 지속되는 환자 등이다. Campylobacter coli의 항균제 감수성은 erythromycin과 tetracycline에 내성인 점을 제외하곤 C. jejuni와 비슷하다. Campylobacter의 항균제 감수성 시험은 용혈된 5% 말혈액이 첨가된 Mueller-Hinton 액체배지법 또는 한천희석법으로 최소억제농도를 측정하는 방법을 사용한다. 설사병과 관련있는 Campylobacter 균주

 

 

B. 배양법
 Campylobacter 분리는 선택배지의 항균제 종류와 농도에 따라 달라지며 배양 조건을 미호기성 상태로 42℃에서 48시간 배양해야 성적이 좋다. 
   

 ⓐ 선택 배지
     Skirrow, Blaser, Butzler, Preston 등의 선택배지 중 하나를 택하여 배양한다. 
 ⓑ 미호기성 배양
     미호기성 상태는 혐기성 단지 내에서 상품화된 가스 생성 봉지를 이용하거나 혼합 가스 (10% CO2, 10% H2, 80% N2)를 넣은 단지에서 배양하는 방법 또는 미호기성 가스 발생기가 들어 있는 자루에 넣고 배양하는 방법 등이 있다. 
ⓒ 증균 방법
        ㉠ Campy-THIO 배지
통상적으로는 권장되지 않으나 검체 수송이 지연될 때 또는 보균자, 증상 발현 후, 항균제 치료 후 등과 같이 C. jejuni의 수가 적은 검체에서 시행할 수 있다. 변 검체를 배지에 접종한 후 2-10℃에서 하룻밤 배양한 뒤 배지 표면에서 12 cm 아래 부위를 따서 Campylobacter 선택배지에 계대배양한다. 
        ㉡ 여과법 (filtration technique)
 0.65-μm cellulose acette 여과지를 비선택 평판배지 위에 올려놓고 그 위에 변 부유물을 접종한 다음 35-37℃ 미호기성 환경에서 하룻밤 배양한 뒤 여과지를 제거한다.
        ㉢ Blood-free Campylobacter 선택 배지
 배지 성분이 다른 Campylobacter 선택 평판배지에 추가 접종한 후 37~42℃에서 배양한다.
        ㉣ Cephalothin을 첨가하지 않은 Campylobacter 선택배지에 37℃로 7일간 배양한다. 
   

 C. 집락 관찰
  배양 후 24시간과 48시간 째에 Campylobacter 배지를 관찰한다. 특징적인 집락은 매우 작고 편평하면서 투명한 집락이 배지 전체에 펴져 있다. 집락색은 노랗거나 분홍색이다. 
   

D. 예비 동정


        ⓐ 전통적 방법
            ㉠ 그람염색
                a. 통상적인 대조염색법
 Safranin 대조염색 시약을 슬라이드에 3분간 놓아둔 후 관찰하면 Campylobacter는 매우 옅게 염색된다.
                b. Basic fuchsin 대조염색법
  0.1% basic fuchsin을 슬라이드에 3분간 놓아둔 후 관찰한다. Campylobacter는 작고 굽은 그람음성 간균으로서 갈매기 날개 모양 또는 S자 형태를 보인다.
            ㉡ 운동성 시험
 식염수와 증류수는 운동성을 억제하므로 균 집락을 영양 액체배지 또는 Mueller-Hinton 액체배지로 부유시킨 후 위상차 현미경이나 광학 현미경으로 관찰한다. Campylobacter는 빠르게 전진하는 운동성 (darting/tumbling)을 보인다.
            ㉢ Oxidase 시험
 Campylobacter는 oxidase 시험 양성이다.
       

ⓑ 혈청학적 검사법 
   라텍스 슬라이드 응집으로 C. jejuni, C. lari, C. coli를 검출하는 키트가 상품화되어 있으며 균속 수준까지 동정이 가능하다. 이 검사법은 각 균종의 세포벽 항원을 검출하는 것으로서 항원 추축액과 세포벽 항원에 대한 특이 항체가 붙어 있는 라텍스 부유물을 혼합한 후 응집 여부로 결과를 판정한다.
      

 ⓒ DNA 탐침법 (DNA probe)
    DNA 탐침법은 C. jejuni, C. lari, C. coli의 확진에 사용하며 상품화되어 있다. 이 키트는 방사선 동위원소를 사용하지 않고 4시간 내에 결과를 얻을 수 있다. 이 방법은 균종 수준 까지는 동정할 수 없다. 
   

  E. 확정 동정
  ⓐ Hippurate 시험에서 양성이면 C. jejuni로 동정하고 음성이면 추가 검사를 시행한다.
  C. jejuni 균주 중 nitrate 시험 음성이면 C. jejuni subsp. doylei로 동정한다.    
  ⓑ 추가 동정 시험
     ㉠ Nalidixic acid와 cephalothin 감수성 시험
 a. 2-3 mL의 brain heart infusion 또는 Mueller-Hinton 액체배지에 집락을 풀어 균부유액을 만든다.
 b. 면봉으로 균 부유액을 혈액한천배지에 바른다. 균 접종량은 집락이 서로 붙어있을 정도의 융합 증식이 되도록 맞춘다.  
c. 30 μg nalidixic acid와 30 μg cephalothin 디스크를 평판배지에 올려놓고 미호기성 환경에서 24시간 배양한다.  

d.  디스크 주위에 집락 증식이 조금이라도 억제되면 감수성으로 판독한다. 
             

    ㉡ H2S 생성시험과 catalase 시험을 추가로 시행한다.

임상적 의의가 있는 Campylobacter 균주의 감별동정 (42℃ 증식)

        

ⓒ C. jejuni 이외의 Campylobacter 균주로 동정되는 집락은 다른 집락과 섞여있는지를 다시 확인하고 생화학적 동정을 다시 시험하여 확인한다. 
    

 F. 보고 방법
  C. jejuni 이외의 균종들도 설사병을 일으킬 가능성이 있기 때문에 분리된 모든 Campylobacter 균주를 보고하는 것이 병원성 규명에 도움을 줄 수 있다.




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