커뮤니티 > 미생물이야기



미생물이야기 Vibrio 속에는 30 균종 이상이 속해있으며 이 중 12 균종이 사람에게 감염을 일으킨다.
2013-08-19 09:56:16
이엠생명과학연구원

Vibrio
 
 
 A.임상적 의의
    

Vibrio는 통성 혐기성 그람음성간균으로서 바다와 하구에 존재하며 담수, 강, 연못, 호수에서도 분리된다.  Vibrio 속에는 30 균종 이상이 속해있으며 이 중 12 균종이 사람에게 감염을 일으킨다. V. cholerae와 V. parahaemolyticus가 Vibrio 장염의 가장 흔한 원인균이다. Vibrio 균의 대부분은 소장에 침범하여 장염을 유발한다. V. cholerae O1과 V. cholerae non-O1은 hemagglutinin에 의해 장점막 융모에 달라붙어 정착화된다. 장내 정착된 V. cholerae O1은 콜레라 독소를 생성하고 이 독소는 세포에 침입하여 세포 내의 cyclic AMP를 증가시키게 되어 전해질 (Na+, Cl-)과 수분이 장내로 분비된다. 급성 콜레라 환자는 하루에 15번 이상의 쌀뜨물 같은 물설사에 의해 심한 탈수현상이 발생하기 때문에 치료를 하지 않으면 사망한다. 수액요법이 치료방법이며 항균제 사용은 설사 기간을 단축시켜 체액손실을 적게 한다. 선택 약제는 tetracycline이며 최근에 동남아시아에서 분리되는 균주들은 다약제 내성균이 증가되고 있다. V. cholerae non-O1은 콜레라 독소를 생성하는 유전자 (ctx)가 없기 때문에 콜레라를 유발하는 경우는 거의 없으나 패혈증, 창상감염, 귀와 눈 부위의 감염, 방광염 등의 다양한 장외감염을 일으킨다. 특히 V. cholerae non-O1에 의한 패혈증은 백혈병과 같은 혈액종양과 암환자, 간경화증, 위 산 분비가 없는 환자 등에서 동반되는 경우가 많으며 예후가 불량하다. V. cholerae non-O1에 의한 설사 질환은 내열성 장내독소와 장관독원성인 hemolysin/cytolysin 등에 의해 발생하는 것으로 알려져 있다.
     V. parahaemolyticus는 1950년 일본 오사카에서 집단적으로 발병한 식중독의 원인균으로 처음 보고된 이후 태평양, 대서양 및 걸프만 연안에서 해산물을 날 것으로 섭취한 후 발생하는 설사 질환의 원인균으로서 일본에서는 식중독 원인균의 50-70%를 차지하며 우리나라도 어패류를 흔히 생식하므로 이 감염은 많을 것이다. V. parahaemolyticus 설사 질환은 내열성 독소인 hemolysin, hemagglutinin, 편모 등에 의해 설사가 발생하며 드물게 이질 또는 콜레라와 유사한 증상을 보일 때도 있다. V. parahaemolyticus에 의한 장내감염은 대부분 증상이 경미하며 3일이내에 스스로 회복되는 설사병이기 때문에 치명적인 예가 드물며 항균제 치료는 필요없다. 그러나 장외감염은 간경변증, 당뇨병, 알콜중독, 백혈병과 같이 면역기능이 저하되거나 만성 질환을 가진 환자에서 주로 발생할 뿐 아니라 혈관내 용혈을 일으키기 때문에 사망률이 높아 신속한 진단과 치료가 요구된다. 또한 V. parahaemolyticus에 의한 장외감염은 유병률이 낮아 Vibrio 감염을 의심하지 못할 때가 많으므로 보통의 방법대로 배양을 진행하게 되며, 혈액한천이나 MacConkey 한천배지에서도 증식되지만 이 세균을 의심하지 않을 때에는 다른 세균으로 잘못 동정하거나 정확한 동정에 오랜 시간이 소요되어 조기진단 시기를 놓칠 수 있기 때문에 그람염색의 신속한 보고와 함께 혈액한천배지에서 oxidase양성 집락을 찾거나 TCBS 배지에 접종해야 한다. 현재까지 보고된 V. parahaemolyticus의 장외감염증은 대부분 하지의 창상감염, 외이감염, 안감염, 패혈증, 요로감염 등이다. 1981년부터 1993년 사이에 플로리다에서 발생한 Vibrio 감염에 대한 역학조사에 의하면 V. parahaemolyticus 감염 빈도는 장염, 창상감염, 패혈증의 순서로서 각각 58, 27, 8%였으며 사망률은 패혈증이 33%로 가장 높았고 창상감염의 사망률은 5%였으며 장염에 의한 사망자는 없었다. V. mimicus, V. hollisae와 V. fluvialis는 장염을 일으킬 수 있다. V. mimicus는 비호염성 세균으로서 드물게 콜레라와 유사한 장염을 일으킨다. V. hollisae는 복통이 심하며 TCBS 배지에서 증식이 불량하므로 진단이 어렵다. V. fluvialis는 대부분 방글라데시에서 분리되며 주로 소아에서 구토와 탈수 증상을 일으킨다. Vibrio 균종은 Mueller-Hinton 배지에서 증식이 잘 되므로 디스크 확산법으로 감수성 시험을 한다.

 
 
 B.배지 관찰
Vibrio 균종은 일차 배양배지에서도 성장할 수 있으나 선택배지를 사용하는 것이 균 검출에 도움이 된다. 하지만 Vibrio 장염은 산발적으로 발생하는 경우가 많고 계절에 따라 발생빈도가 다르기 때문에 항상 선택배지를 사용하는 것은 비효율적일 수 있다.
 
 
 
 ⓐ혈액한천배지
배지 내의 염류 농도는 대부분의 Vibrio 증식에 충분하다. Oxidase
시험에서 양성 반응이면 Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas 균종일 가능성이 있다. 일부 Pseudomonas 균주는 oxidase 양성이므로 감별이 필요하다. V. cholerae와 V. fluvialis의 일부는 용혈성을 보인다.

 
 
 
ⓑ장내 세균 배양배지
ⓒMacConkey 배지에서는 유당 발효 음성이 많다.

선택배지
  
 ㉠ TCBS (Thiosulfate citrate bile salt sucrose) 한천 배지
35-37℃에서 호기성 상태로 배양한 후 집락 색깔과 Vibrio 균주의 증식 정도를 관찰한다 (표 11-9).

 ㉡ 48시간 배양에서 Vibrio 증식이 없으면 음성으로 보고한다.
Proteus와 Enterococcus 등의 일부 장내 상재균은 TCBS 배지에서 증식할 수 있으나 집락이 작고 투명하기 때문에 쉽게 감별할 수 있다. 그러나 자당 발효 Proteus 균주는 노란 색 집락을 형성하므로 Vibrio와의 감별이 쉽지 않다. Pseudomonas와 Aeromonas 균주가 증식되면 파란색 집락을 형성한다.
 

   
    ⓓ 증균배지
        ㉠ Alkaline peptone water (pH 8.5)
            35-37℃에서 호기성 상태로 6-12시간 배양한 후 TCBS 평판 배지에 계대배양한다. V. para-
            haemolyticus는 alkaline peptone water에 3% NaCl을 첨가한 배지를 사용한다.

 

C. 생화학적 동정
   

    ⓐ TCBS 배지에서 집락의 특징과 선별 동정 시험에서 Vibrio로 의심되면 전통적 방법과 상품화된
        키트 등을 이용하여 균종명까지 동정한다.
    ⓑ 동정시 주의할 사항
        ㉠ 그람음성간균용 동정 키트로 일부 Vibrio 균종은 동정이 된다. 키트로 동정할 때는 0.85-1%
            식염수로 균액을 만들어야 하며 Vibrio의 키트 동정은 결과가 부정확할 수 있으므로 전통적
            방법으로 확인하는 것이 좋다.
        ㉡ Aeromonas hydrophila group은 V. fluvialis로 잘못 동정될 수 있으므로 V. fluvialis가
            동정되면 O/129 감수성 시험이나 호염성 시험으로 확인해야 한다.
            a. O/129 (2,4-diamino-6,7-di-iso-propylpteridinephosphate) 감수성 시험
                ㄱ. 0.5 McFarland 탁도로 균 부유액을 만든다.
                ㄴ. 균집락이 서로 붙어 있을 정도로 증식되도록 Muller-Hinton 평판배지에 접종한다.
                ㄷ. Vibriostatic agent인 O/129 150 μg 디스크를 평판에 붙인 다음 35-37℃에서 24시간
                     동안 배양한다.
                ㄹ. V. fluvialis는 억제되며 Aeromonas 균주는 억제되지 않는다.
            b. 호염성 시험
                호염성 시험은 Vibrio 균종과 다른 세균을 감별하는데 기본이 되며 비호염성 Vibrio
                균종인 V. cholerae와 V. mimicus를 호염성 Vibrio와 구분하는 가장 중요한 시험이다.
                ㄱ. 집락을 0과 1% NaCl 영양액체배지에 접종한다.
                ㄴ. 35-37℃에서 18-24시간 동안 배양한 다음 증식을 관찰하다.
                ㄷ. V. fluvialis는 0% NaCl에서는 증식되지 않고 1% NaCl에서는 증식되나 A. hydrophila
                     group은 0과 1% NaCl에서 모두 증식된다. .

D. 동정

    ⓐ V. cholerae
        ㉠ 혈청학적 동정
            a. V. cholerae O1 항혈청으로 V. cholerae로 동정된 균들을 시험한다.
                ㄱ. V. cholerae로 동정된 집락을 비선택배지에 계대배양한다.
                ㄴ. 35-37℃에서 5-8시간 배양 후 진한 균 부유액을 만든다.
                ㄷ. 슬라이드 위에 균 부유액 한 방울과 O1 항혈청 한 방울을 혼합한다.
                ㄹ. 슬라이드를 1분간 회전시키고 응집을 관찰한다.
                ㅁ. V. cholerae O1 혈청형은 응집 양성이다.
                ㅂ. O1 항혈청을 보관하고 있지 않은 검사실은 국립보건원에 의뢰한다. 국립보건원에서는
                     O1 및 O139 혈청형 시험이 가능하다.
        ㉡ 독소생산능 시험
             a. 라텍스 시험
                 V. cholerae 독소와 E. coli의 이열성 내독소를 검출하는 상품화된 키트를 이용할 수
                 있다.
             b. 효소면역법
                 상품화된 키트가 없으므로 공인기관이나 연구실에서만 사용할 수 있다.
             c. 세포배양 독소 중화법
                 공인기관이나 연구실에서만 시험한다.
        ㉢ 각 검사실은 모든 V. cholerae O1 균주에 대하여 확정동정 및 혈청형 시험과 독소 생산능
            시험을 위해 공인된 검사기관 (국립보건원)에 의뢰해야 한다. 모든 V. cholerae O1 균주가
            독소를 생성하지는 않으며 비병원성인 균주도 있다.

 


 

    ⓑ V. parahaemolyticus
        ㉠ 생화학적 동정
            V. parahaemolyticus의 생화학적 성상은 V. vulnificus, V. alginolyticus, V. carchariae
            등과 매우 유사하므로 정확한 감별 동정이 필요하며, Voges-Proskauer 검사, 8%와 10%
            NaCl 영양 액체배지에서의 증식유무, sucrose, salicin, cellobiose, lactose, L-arabinose
            등의 당발효 유무 등이 중요한 감별 시험이다.
        ㉡ Kanagawa 현상
            병원성이 있는 V. parahaemolyticus 균종은 내열성 hemolysin을 생성한다. Hemolysin은
            염농도가 높고 mannitol을 함유한 Wagatsuma 배지에서 사람의 O 적혈구를 용해하는
            특징을 보이며 이를 Kanagawa 현상이라 한다. 병원성이 없는 균종은 대부분 Kanagawa 현상
            음성이다.
        ㉢ 항균제 감수성 시험
            V. parahaemolyticus 균종은 ampicillin과 carbenicillin에 내성이며 colistin에 감수성
            이므로 V. vulnificus와 감별할 수 있다.

 

E. 보고 방법
    분리된 모든 Vibrio 균주는 보고해야 한다. 특히 V. cholerae non O1 혈청형의 보고는 집단
    유행의 역학적 조사에 중요하다.  




대전광역시 유성구 문지동 KAIST문지캠퍼스강의동L605호 대표이사:(원장)서범구 사업자번호:314-86-01479
전화번호:1800-0250 팩스번호:07074559748 관리자이메일:puom9@naver.com
이엠생명과학연구원. All Rights Reserved