커뮤니티 > 효소enzyme



효소enzyme 효소-결합 면역흡착법과 면역자기분리법에 대해 알아보자.
2013-08-22 17:31:46
이엠생명과학연구원

효소-결합 면역흡착법

효소-결합 면역흡착법 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)은 항원의 존재를 탐지하는데 사용되는 매우 민감한 실험 방법이다. ELISA에는 많은 접근 방법이 있다. 그것들은 일반적으로 직접 또는 간접적인 샌드위치 방법으로 이행되지만, 경쟁적 분석으로도 수행될 수 있다. 어떤 ELISA 방법이든지 흥미있는 항원을 적절한 완충용액에 농축하여 용해시킨다. 이 때 항원과 항체들의 형태에 따라 직접적 또는 간접적 분석이 수행될 수 있다. 직접적 샌드위치 ELISA에서 1차 항체는 microtiter plate, 미세원심분리관, 또는 고체 지지체에 부착된다. 그 후 항원이 첨가되고 항체 [antigen capture (항원포획)]와 결합하기 위해 배양한다. 항원이 결합된 후에 신호 항체라 불리는 2차 항체를 첨가한다. 효소 alkaline phosphatase는 신호분자의 예로 이들 2차 항체와 접합한다. 그 후 2차 항체는 이미 1차 항체와 결합되어 있는 항원 [antibody capture (항체포획)]과 결합한다. 후에 항원은 첨가되는 신호 항체라 불리는 2차 항체와 결합한다. 그 후 기질은 신호 분자의 존재에 대한 반응으로서의 색 변화를 일으키기 위하여 첨가된다. 이 색 변화는 보통 존재하는 항원의 양에 비례하므로 정량분석이 가능해진다. 이것은 주어진 시료에 존재하는 항원의 양을 재는 것을 가능하도록 한다.

장점과 단점

다른 탐지 또는 정량 방법보다 ELISA 방법을 사용하면 많은 장점이 있다. ELISA는 민감하고 표준 곡선과 연관하여 사용될 때 양을 잴 수 있다. 단점은 모든 항체를 기초로 하는 방법과 비슷하고 교차반응성 및 비특이적 신호 생성과 관련이 있다. ELISA는 특히 환경 시료를 사용할 때 일관된 결과를 제공할 수 있게 최적화 되어야만 한다. ELISA는 설명된 것처럼, 매우 낮은 농도의 항원의 탐지에도 부적절하다. ELISA의 다른 형태는 낮은 표적 농도를 탐지할 수 있다고 기술되어 왔다. 이런 분석의 하나는 경쟁적 ELISA로 알려졌다.

 

면역자기 분리법

자기 면역분리 (immunomagnetic separation)는 항원 포획방법으로 paramagnetic bead와 결합된 항체를 이용하여 항원을 붙이고 농축하고 정제한다. 이 접근법의 인기의 증가는 그것의 쉽고 간단한 조건, 낮은 비용과 과정의 자동화 능력에 기인한다. 그것의 가장 단순한 형태에서, 면역자기 분리는 항체가 입혀져 있는 자철광 bead와 자석으로 수행된다. 본질적으로 자기 구슬 위에 입혀진 항체들은 용액 내의 항원과 결합하고 그 후에 자석을 사용하여 용액으로부터 분리한다. 자기 분리를 위해 사용된 bead는 100 ㎚에서 20 ㎛ 범위로 작고 전형적으로 철산화물 (자철광)로 만든다. 그러한 입자는 자기장에서 강하게 반응하지만 자기장이 제거되었을 때는 자력도 계속 유지되지 않는다.

 

장점과 단점

면역자기 분리는 이질적 기질로부터 표적을 분리하고 정제하는 효율적인 방법이다. 대부분의 경우 면역자기 분리는 또한 특정한 표적 분리를 위해 사용할 수 있는 가장 쉬운 방법 중의 하나이다. 비록 교차반응성의 문제 또한 명백하지만 대부분의 경우 불특정 신호의 생산과 연관된 문제들은 그리 문제가 되지 않는다. 어떤 미생물학적 방법론에서든 그런 분리들은 최적화와 형태 (즉, 미소원심분리나 컬럼 기질 분리)의 적절한 선택이 요구된다.





대전광역시 유성구 문지동 KAIST문지캠퍼스강의동L605호 대표이사:(원장)서범구 사업자번호:314-86-01479
전화번호:1800-0250 팩스번호:07074559748 관리자이메일:puom9@naver.com
이엠생명과학연구원. All Rights Reserved