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효소enzyme glucoside류 화합물의 가수분해는 촉매하는 효소로 다음 반응을 촉매한다.
2013-08-22 17:33:41
이엠생명과학연구원

1. β-Glucosidase

 

glucoside류 화합물의 가수분해는 촉매하는 효소로 다음 반응을 촉매한다.

Glucosides + H2O → 당 + aglycons

토양에서 β-Glucosidase가 α-Glucosidase나 α-Galactosidase, β- Galactosidase보다 우세하다. β-Glucoside의 가수분해산물은 토양미생물의 중요한 에너지원이라 믿어진다.

 

1.1 원리

β-Glucosidase의 활성측정원리는 PDE의 그것과 상이하다. 토양에 pH 6.0으로 완충된 p-nitrophenyl-β-D- glucoside(PNG)용액과 toluene을 가하고 배양할 때 β-Glucosidase에 의해 방출된 p-nitrophenol을 비색정량한다. β-Glucosidase의 기질인 PNG가 과잉의 NaOH 존재하에 시간이 지남에 따라 가수분해되므로 PME의 정량시 p-nitrophenol추출에 쓰인 0.5M NaOH 대신에 pH 12의 THAM완충용액으로 토양을 처리한다. 관련된 반응은 다음과 같다.

1.2 활성측정법

  1. 기구

PME 참조편

  2. 시약

1) toluene, MUB완충용액, 0.5M CaCl2용액, p-nitrophenol완충용액

PME의 시약 참조편

2) p-nitrophenyl-β-D-glucoside(PNG)용액, 0.025M

0.377g PNG를 pH 6.0의 MUB완충용액에 녹여 50㎖로 한다. 이 용액은 냉장고에 보관.

3) THAM 완충용액, 0.1M, pH 12와 약 10

PDE의 시약 참조편

  3. 조작과정

1g의 토양( < 2mm)을 50㎖ 삼각플라스크에 취하고 0.25㎖의 toluene, 4㎖의 pH 6.0 MUB 완충용액, 1㎖의 PNG용액을 가한다. 수 초간 흔들어서 내용물을 혼합한다. 플라스크에 마개를 하고 37℃에서 배양한다. 1시간 후 마개를 제거하고1㎖의 CaCl2용액과 0.1M, pH 12의 THAM완충용액 4㎖를 가한다. 수 초간 플라스크를 흔들고 Whatman NO. 2여지로 토양현탁액을 여과한다. 황색 여액의 흡광도를 400㎚에서 분광광도계로 측정한다.

추출된 p-nitrophenol의 량은 PME 활성의 정량에 쓰인 검량선에 따라 계산한다. 여액의 흡광도가 PNP의 검량선보다 높으면 0.1M THAM 희석액(pH 약10)으로 희석한 후 측정치가 표준곡선내에 들도록 한다.

- 주의 -

PNG용액은 냉장고에 보관하면 수 일간 안정하다. 방출된 PNG의 추출에 사용된 pH 12의 THAM완충용액을 처리할 때 점토의 분산과 토양유기물의 추출을 막기 위하여 CaCl2를 가할 필요가 있다.




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