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효소enzyme LDH(Lactate Dehydrogenase, LD) 산화환원효소
2013-08-22 17:43:58
이엠생명과학연구원

LDH(Lactate Dehydrogenase, LD) 산화환원효소

1. 개요

1) 정의 : Glycolysis system(해당계)의 최종단계에서 Lactate ⇔ Pyruvate 가역반응을

촉매하는 산화.환원효소

2) 반응식 LDH pH 9.5(8.8-9.8)

Lactic acid(Lactate) + NAD+ ?------------? Pyruvic acid(Pyruvate) + NADH

LDH pH 7.4(7.2-8.0)

3) 분포

신장> 골격근> 간> 심장 > 췌장> 비장 > 뇌 > RBC. (장기 특이성이 가장 낮은 enzyme).

4) Isoenzyme : 전기영동, 장기 특이성 파악 / 그림 보기

2개의 subunit M(muscle), H(heart) 결합으로 구성된 tetramer(4중합체).

- LDH5 LDH4 LDH3 LDH2 LDH1 +

(M4) (M3H) (M2H2) (M3H1) (H4)

분포 골격근, 간에 많이 분포 폐,WBC,부신 심장,RBC,신장

정상치 2-6% 5-11% 18-25% 27-37% 20-27%

질병 근육

5) 측정시 주의 사항질환,간질환 폐경색증 용혈성빈혈, 심근경색

① Hemolysis serum 절대 사용 금지 (혈구에는 혈청보다 200배정도 높다)

② 중금속에 오염이 없도록 할 것 (LDH 활성을 중지시킴으로)

③ pyruvic acid는 고순도품을 사용할 것(기질로써 작용)

④ serum의 신속한 분리

⑤ LDH5, LDH4 : 불안정 (LDH4 더 불안정) -- 동결보관보다 실온보존이 더 안정적이다.

⑥ Lipemic, 황달 검체 : 낮은 결과 초래

 

2. 측정법

A. Cabaud - Wroblewski 법 (비색법) 원리

LDH(37℃ 30분)

Pyruvate + NADH --------------------→ Lactate + NAD+

pH 7.4 (7.2-8.0)

잔여 pyruvate + 2.4-D.N.P.H ---→ Hydrazone + 0.4N NaOH -→ Brown(적갈색)

참고치 : 200 - 450 unit

Wroblewski unit :혈청 1ml에 의해 NADH 흡광도가 25℃에서 매분 0.001의 감소할 때 1unit.

B. Kinetic method (UV 법) 원리

LDH(37℃ 30분)

Pyruvate + NADH ←--------------------→ Lactate + NAD+

pH 9.0 / pH 7.4

조효소 NADH, 340nm에서 흡광도 증가 / 감소를 측정

완충액 : Phosphate를 사용




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